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NK-92和NK-92MI细胞培养注意事项

2024-04-10 来源:赛伦博士 阅读次数:1467

很多朋友对培养NK-92和NK-92MI细胞没有信心,这种细胞培养时需要特别注意以下几点:
       (超级干货,建议收藏以免使用时找不到了)


1. 细胞生长特性

     NK-92和NK-92MI细胞均为悬浮生长,大部分细胞聚集成团,少数分散的细胞,并且细胞间隙会有较多的死细胞和细胞碎片;


2. 白介素非常重要

     NK-92和NK-92MI细胞对营养需求比较高,建议使用进口胎牛血清和马血清培养,白介素2的质量对细胞的生长影响非常大,建议新配制的白介素2在4度保存不超过1周。


3. 细胞换液及减少离心

    换液周期为2天,建议半量换液1-2次后离心全量换液一次的方式操作,并且尽量减少离心对细胞机械损伤的次数。


4. 聚团的处理办法

       1. 细胞生长时聚集的细胞团会越来越大,细胞团在显微镜下观察为白色透亮的是正常细胞,

       2. 如果细胞聚集很多,出现了细胞团中部发暗时可以在换液后将细胞团轻轻摇散,或者用移液器轻轻吹散,吹打力度不可过大,否则会出现大量死细胞和细胞碎片。

       3. 细胞培养中没有聚团的细胞活性会很低。细胞对营养要求很高,记得千万不能让细胞团块太大而导致营养不足,那样的话细胞48小时就会死亡。

       4. 因为细胞成团长,细胞计数可能会不准确,团块不可以吹散计数,散落的细胞细胞活性会不好,所以细胞检测活性有时也是不准确的。


5. 收货后的处理方法

     运输条件可能会对细胞造成一定的影响,当收到上海WHELAB寄送的细胞后请按以下方法处理:

        A. 收到细胞后静置,显微镜下观察细胞并拍照,主要找聚集的细胞团;

        B. 将培养瓶竖置,静置4~6h,肉眼观察大部分细胞团都沉到底部后,将多余的培养基轻轻倒入50ml离心管中离心收集一部分细胞,底部留3~4ml(剩余20ml左右时可换用移液器吸取上清,保证大部分细胞团留在瓶中),再补加3~4ml新鲜培养基进行培养,若细胞量较多可分成两瓶,离心收集的细胞也可单独接种培养;

        C. 细胞对机械损伤特别敏感,所以最好不要离心,或减少离心。


6. 细胞复苏操作

    该类细胞复苏时注意不要离心处理,提前准备一个离心管,加10ml培养基,把溶解后的冻存细胞接入,静置2小时左右,待细胞沉降在底部,去上清,再用完全培养基接到T25培养瓶内进行培养。

    总体来说,养好NK92和NK92MI细胞不太容易,大家注意尽量减少离心对细胞的损伤,白介素2尽量现用现配,保持培养基新鲜和活性。关注上海WHELAB细胞,培养细胞不用愁,希望这些方法能够对您有所帮助,祝您的细胞培养工作顺利进行!